超高通量组织研磨仪|青霉素类药物及其代谢产物UPLC-MS检测中一大亮点

前言：超高通量组织研磨仪使样品均质化更彻底，方便后续萃取;真空离心浓缩仪浓缩样品，方便快捷。

青霉素 G(Penicillin G)作为β-内酰胺类抗生素对于人和动物尿道、胃肠道和呼吸道感染等疾病具有较好的治疗优势。[1]但是在兽用治疗中的用药不规范会导致药物在奶和动物组织中的残留，这些药物残留及其代谢产物会对有相关过敏史的人产生健康危害。

超高效液相色谱-质谱法（UPLC-MS）是一种将超高效液相色谱（UPLC）与质谱（MS）结合的高效且精准的分离检测技术。[2]相关研究中采用超高效液相色谱串联质谱法同时测定了肉类中青霉素 G及其代谢产物苄青霉噻唑酸、苄青霉去羧噻唑酸和苄青霉二酸的方法。

在此基础上，我们对该实验方法加以改良与补充，通过超高通量组织研磨仪576对样品进行研磨提取操作，该方法提取质量高，效果均一，无交叉污染，并经真空离心浓缩样品，后续通过超高效液相色谱串联质谱法，灵敏快速地对样品进行检测分析。

实验步骤：

1、称取处理成小块的组织样品于50mL研磨管中，加入青霉素V内标[3]，加2mL水，乙腈定容至20mL，经超高通量组织研磨仪研磨提取。

2、离心后取10mL上层清液，经真空离心浓缩至蒸干。

3、蒸干后加入2mL乙酸铵缓冲溶液溶解残余物，涡旋15s，加入5mL正己烷，涡旋1min，转移至50mL离心管中，离心去除上层有机相，正己烷重复去脂一次。4、吸取1mL水相于2mL聚丙烯离心管中，离心后过水相滤膜，待测。

5、另取7支离心管中分别按标准曲线的浓度加入适量标准溶液，再加入等量空白样本，混匀，放置10min后，与样品一起处理，制作工作曲线系列。

[1]注：本实验方法仅供参考，具体详细参数可查阅相关文献确定。

实验方法优势：

在UPLC-MS方法中，样品处理液中强极性和弱极性杂质成分使用六通切换阀切换至废液而不进入质谱仪，分析多份样品后不需清洗质谱仪的样品锥，同时采用基体匹配标准内标法定量，有效补偿了基体效应。[1]

在此基础上通过超高通量组织研磨仪和真空离心浓缩仪进行优化实验步骤，超高通量组织研磨仪使样品均质化更彻底，方便后续萃取；真空离心浓缩仪补充了溶液蒸发过程中的爆沸，减去了添加饱和NaCl的步骤，减少后续离子干扰，使本实验方法更快速安全，灵敏准确。

文中所用仪器：

1、真空离心浓缩仪

真空离心浓缩仪可用于化学、生物、医药等领域的样品制备和分析，在生命科学领域中，真空离心浓缩仪常用于分离和浓缩蛋白质、核酸和其他生物分子。真空离心浓缩是一种将溶剂蒸发出去以浓缩或干燥生物(非生物)样品的过程。采用离心力、真空和加热相结合的方法使样品中的溶剂快速蒸发，从而达到浓缩样品的目的，方便后续实验的分析和检测。

2、超高通量组织研磨仪

超高通量组织研磨仪是一类性能稳定，处理通量高，重复性好的研磨设备，可任意定制各种规格适配器，广泛应用于组织破碎，生物活性物质提取等领域。

参考文献：

[1]刘创基,王海,杜振霞,等.超高效液相色谱-串联质谱法同时测定牛肉中青霉素类药物及其代谢产物[J].分析化学,2011,39(05):617-622.

[2]胡瑞雪.食品残留青霉素的热解产物青霉噻唑酸的毒性分析与评价[D].吉林大学,2024.DOI:10.27162/d.cnki.gjlin.2024.002900.

[3]European Commission，Council Regulation ( EEC) ． 2377 /90 /EC． Off． J． Eur． Commun． ，1990，L224: 1