净信研磨仪和真空离心浓缩仪助力---探讨小鼠急性肺损伤机制

题目：基于花生四烯酸代谢途径探讨炎调方治疗脂多糖所致急性肺损伤的机制

作者：李鹏程，陈天阳，方荣，张安娜，吴思佳，刘伟，王倩

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20241016

急性肺损伤（ALI）是一种严重的呼吸系统疾病，临床特征表现为呼吸急促、呼吸困难、严重者可出现顽固性低氧血症、急性呼吸窘迫综合征，有较高的发病率和致死率。直至今日，仍然没有治疗急性肺损伤的特效药，然而科学家对该疾病的研究从未停止。上海中医药大学附属曙光医院王倩博士带领的研究团队在研磨仪和真空离心浓缩仪的助力下进行小鼠急性肺损伤机制的探究。

相关实验

正常组小鼠6只，模型组小鼠6只（腹腔注射脂多糖LPS溶液建立小鼠 ALI 模型），给药组：地塞米松组（2 mg·kg-1）、炎调方低剂量组（18 g·kg-1）、炎调方高剂量组（36 g·kg-1）各6只。

花生四烯酸（AA）类代谢物检测样品制备

♦血清 AA 样品制备

取血清 30 μL，置于 1.5 mL 离心管，加混合液（甲醇：乙腈，1:1，v/v）150 μL，盖好盖 子后涡旋震荡 30 s，使蛋白质变性沉淀，在 4 ℃，15 000 r·min-1 离心 10 min，取上清 144 μL 置于新的 1.5 mL 离心管中，真空离心浓缩仪吹干；加入混合液（水：甲醇：乙腈，2:1:1，v/v）60 μL 至吹干的离心管中，涡旋震荡 60 s，使干燥残渣复溶，在 4 ℃，15 000 r·min-1 离心 10 min，取上清 50 μL 置内衬管中，进液质联用仪（LC-MS/MS）分析， 采用标准曲线法定量。

Fig2（Nat. Plants，2024）

♦肺组织AA样品制备

准确称取肺组织 30 mg 置于 1.5 mL 离心管，加入混合液（甲醇：乙腈，1:1，v/v）600 μL， 放入 2 颗研磨珠，使用研磨仪，65 Hz，研磨 1 min，研磨2 次。

将研磨后的匀浆液在 4 ℃，15 000 r·min-1 离心 10 min，取上清 480 μL 置于新的 1.5 mL 离心管中，用真空离心浓缩仪吹干。加入混合液（水：甲醇：乙腈，2:1:1，v/v）96 μL 至吹干的 离心管中，涡旋震荡 60 s，使干燥残渣复溶，在 4 ℃，15 000 r·min-1 离心 10 min，取上清 80 μL 置于内衬管中，进 LC-MS/MS 分析，采用标准曲线法定量。

♦色谱条件

采用 ACQUITY UPLC BEH C18 色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），流动相 A（0.1%甲酸水）- 流动相 B（乙腈），梯度洗脱（0~10 min，48%~75%B；10~10.1 min，75%~90%B；10.1~12 min，90%B；12~12.1 min，90%~48%B；12.1~14 min，48%B）；进样量为 3 μL，体积流量为 0.25 mL·min-1，柱温恒定为 36 ℃，总离子流图如下

注：A.对照品；B.血清；C.肺组织；1.PGE2；2. PGD2；3. 15-HETE；4. 11(S)-HETE；5. 5-HETE；6. 14,15-EET；7. 11,12-EET；8. 8,9- EET

图 1 花生四烯酸类代谢物检测总离子流色谱

通过对正常组、模型组和给药组小鼠肺组织中花生四烯酸（AA）类代谢物对比分析，炎调方可影响 AA 在体内的 3 条主要代谢途径，通过降低血清和肺组织中促炎类代谢产物的含量，以及提高血清和肺组织中 11,12-EET 的含量而发挥广泛的抗炎作用，从而减轻 LPS 所致 ALI。通过研磨仪研磨样本，把目标物质释放，加入试剂提取，然后用真空离心浓缩仪浓缩，浓缩后的样本可进行气相色谱-质谱(GC-MS)、液相色谱-质谱(LC-MS)分析。研磨仪和真空离心浓缩仪的配合使用，使GC-MS/LC-MS分析更方便，上机检测前处理更简单，更快捷。

文中所用仪器

真空离心浓缩仪

真空离心浓缩仪可用于化学、生物、医药等领域的样品制备和分析，在生命科学领域中，真空离心浓缩仪常用于分离和浓缩蛋白质、核酸和其他生物分子。真空离心浓缩是一种将溶剂蒸发出去以浓缩或干燥生物(非生物)样品的过程。采用离心力、真空和加热相结合的方法使样品中的溶剂快速蒸发，从而达到浓缩样品的目的，方便后续实验的分析和检测。

高通量组织研磨仪

高通量组织研磨仪能将任何来源(包括土壤、植物和动物的组织/器官、细菌、酵母、真菌、孢子、古生物标本等)的原始DNA、RNA和蛋白质进行提取和纯化。

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